亚洲无码综合视频,激情综合亚洲色婷婷五月,av大片在线无码永久免费网址,三上悠亚在线精品二区

2025-05-15 05:52:44單細(xì)胞分選
單細(xì)胞分選是一種用于分離和篩選單個細(xì)胞的技術(shù)。它基于細(xì)胞的物理或化學(xué)特性，如大小、形狀、表面標(biāo)記等，利用微流控技術(shù)或激光等方法，實現(xiàn)單個細(xì)胞的精確操控和分離。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、疾病診斷、藥物篩選等領(lǐng)域，對于深入理解細(xì)胞異質(zhì)性、探索疾病機(jī)制、發(fā)現(xiàn)新的治療靶點具有重要意義。

資源：549個    瀏覽：34次展開

單細(xì)胞分選相關(guān)內(nèi)容

產(chǎn)品名稱

所在地

價格

供應(yīng)商

咨詢

單細(xì)胞分選分離器—HW-HURRICANE颶風(fēng)系列
國內(nèi) 遼寧
面議
大連華微生命科技有限公司

售全國

我要詢價 聯(lián)系方式
單細(xì)胞分選分離器—“HW-BREEZE” 微風(fēng)系列
國內(nèi) 遼寧
面議
大連華微生命科技有限公司

售全國

我要詢價 聯(lián)系方式
單細(xì)胞分選分離系統(tǒng)—龍卷風(fēng)系列“HW-TORNADO“
國內(nèi) 遼寧
￥4000000
大連華微生命科技有限公司

售全國

我要詢價 聯(lián)系方式
單細(xì)胞分選分離系統(tǒng)—暴風(fēng)系列”HW-STORM“
國內(nèi) 遼寧
￥2000000
大連華微生命科技有限公司

售全國

我要詢價 聯(lián)系方式
單細(xì)胞分選分離系統(tǒng)—疾風(fēng)系列”HW-GALE“
國內(nèi) 遼寧
￥900000
大連華微生命科技有限公司

售全國

我要詢價 聯(lián)系方式
2023-03-07 22:09:15高通量單細(xì)胞力譜測定！多功能單細(xì)胞顯微操作技術(shù)助力單細(xì)胞力學(xué)研究
單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測定對于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級別的操作精度并可測量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實現(xiàn)高通量的測量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對準(zhǔn)確的值，無法實現(xiàn)高通量測量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。而多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實驗結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動化，能夠快速測量細(xì)胞粘附力。使用FluidFM對細(xì)胞操作的基本流程 FluidFM在粘附力測量上具備顯著優(yōu)勢。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動化的控制系統(tǒng)能夠在短時間內(nèi)測量大量細(xì)胞粘附力，評估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測量因準(zhǔn)備時間過長而錯過最佳測量時間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精準(zhǔn)的結(jié)果。近期，Agoston等人使用多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM實現(xiàn)了高通量細(xì)胞粘附力測量，對同種細(xì)胞不同區(qū)以及不同細(xì)胞之間的粘附力進(jìn)行測量和比較。作者首先對Vero和Hela細(xì)胞在不同狀態(tài)下的粘附力進(jìn)行了測量和比較，總共測量了214個細(xì)胞。通過比較明膠涂層上處于單個細(xì)胞、孤島狀細(xì)胞、致密連接細(xì)胞以及單層細(xì)胞上游離細(xì)胞之間的粘附力，能夠明顯觀測到Vero細(xì)胞處于致密連接的細(xì)胞粘附力最大，大概在750 nN左右，隨著細(xì)胞單細(xì)胞層的稀疏，細(xì)胞粘附力有所下降，而處于細(xì)胞層頂部的細(xì)胞粘附力最低僅為50 nN左右。這一點充分說明上皮細(xì)胞能夠在細(xì)胞之間形成緊密的連接，而處于細(xì)胞層外的細(xì)胞則幾乎沒有粘附力。而對于HeLa這樣的腫瘤細(xì)胞測量的結(jié)果卻顯示出了截然不同的結(jié)果，處于不同狀態(tài)的細(xì)胞有著近似的粘附力，基本都在200 nN左右，這與處于單個游離上皮細(xì)胞的粘附力十分接近，表明HeLa細(xì)胞在不同環(huán)境下仍然具有較高遷徙能力。使用FluidFM對不同區(qū)域細(xì)胞的FD曲線測定結(jié)果和對比        通過對這兩種細(xì)胞的最大粘附力、最大粘附能量、最大拉伸距離和細(xì)胞接觸面積進(jìn)行統(tǒng)計分析可以發(fā)現(xiàn)，HeLa腫瘤細(xì)胞在粘附力和粘附能量上均有所降低，但是當(dāng)HeLa細(xì)胞形成了單層后，兩者區(qū)別不大。對比Hela和Vero在不同生長狀態(tài)下的最大粘附力、最大粘附能量、粘附拉伸距離和粘附面積。再進(jìn)一步對Vero與HeLa細(xì)胞最大粘附力與距離和接觸面積進(jìn)行對比，依然可以得到與單獨比較粘附力相同的結(jié)果，并且最大能量與細(xì)胞接觸面積的比值中也存在著類似的結(jié)果。由此可見腫瘤細(xì)胞通過降低自身粘附力從而獲得了更好的遷移能力。對不同狀態(tài)Vero和A549之間的粘附力/粘附距離、粘附力/粘附面積、粘附能量/粘附面積 總結(jié)       細(xì)胞粘附力測定在細(xì)胞生命科學(xué)研究中起著至關(guān)重要的作用，然而傳統(tǒng)手段中有著各種各樣的局限性，主要原因是缺乏一種有效抓取細(xì)胞并進(jìn)行力學(xué)測定的手段?，F(xiàn)如今FluidFM技術(shù)在細(xì)胞粘附力測定中的應(yīng)用，使得研究者們有了一種能夠有效、低損的方式抓取細(xì)胞，配合原子力顯微鏡精確測量的特性，真正意義上做到精準(zhǔn)、無損、快速的測量單細(xì)胞粘附力，幫助研究者尋找細(xì)胞粘附力與細(xì)胞生命發(fā)展、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。 【參考文獻(xiàn)】[1] A. Sancho, M. B. Taskin, L. Wistlich, P. Stahlhut, K. Wittmann, A. Rossi & J. Groll. Cell Adhesion Assessment Reveals a Higher Force per Contact Area on Fibrous Structures Compared to Flat Surfaces. ACS Biomater. Sci. Eng. 2022, 8, 2, 649–658.[2] P.W. Doll, K. Doll, A. Winkel, R. Thelen, R. Ahrens, M. Stiesch & A.E. Guber. Influence of the Available Surface Area and Cell Elasticity on Bacterial Adhesion Forces on Highly Ordered Silicon Nanopillars. ACS Omega. 2022, 7, 21, 17620–17631.[3] Sankaran, S. Jaatinen, L. Brinkmann, J. Zambelli, T. V?r?s, J. Jonkheijm, P. Cell adhesion on dynamic supramolecular surfaces probed by fluid force microscopy-based single-cell force spectroscopy. ACS Nano 2017, 11, 3867–3874.[4] Sancho, A. Vandersmissen, I. Craps, S. Luttun, A. Groll, J. A new strategy to measure intercellular adhesion forces in mature cell-cell contacts. Sci. Rep. 2017, 7, 46152.[5] Ines, Lüchtefeld. Alice, Bartolozzi. Julián M. M. Oana, Dobre. Michele, Basso. Tomaso, Zambelli. Massimo, Vassalli. Elasticity spectra as a tool to investigate actin cortex mechanics. J Nanobiotechnol. 2020, 18, 147.[6] Dehullu, J. Valotteau, C. Herman-Bausier, P. Garcia-Sherman, M. Mittelviefhaus, M. Vorholt, J. A. Lipke, P. N. Dufrene, Y. F. Fluidic force microscopy demonstrates that homophilic adhesion by Candida albicans Als proteins is mediated by amyloid bonds between cells. Nano Lett. 2019, 19, 3846–3853.[7] Mittelviefhaus, M. Müller, D. B. Zambelli, T. Vorholt, J. A. A modular atomic force microscopy approach reveals a large range of hydrophobic adhesion forces among bacterial members of the leaf microbiota. ISME J. 2019, 13, 1878–1882.[8] F. Weigl, C. Blum, A. Sancho & J. Groll. Correlative Analysis of Intra- versus Extracellular Cell Detachment Events vis the Alignment of Optical Imaging and Detachment Force Quantification. Adv. Mater. Technol. 2022, 2200195.【相關(guān)產(chǎn)品】　　多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)- FluidFM OMNIUM:http://sewtec.com.cn/zt2203/product_386418.html
189人看過
2023-02-24 11:28:18高通量、自動化單細(xì)胞力譜測定！多功能單細(xì)胞顯微操作全新技術(shù)助力單細(xì)胞力學(xué)研究
研究現(xiàn)狀單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測定對于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級別的操作精度并可測量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實現(xiàn)高通量的測量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對準(zhǔn)確的值，無法實現(xiàn)高通量測量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實驗結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動化，能夠快速測量細(xì)胞粘附力。使用FluidFM對細(xì)胞操作的基本流程FluidFM在粘附力測量上具備顯著優(yōu)勢。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最 大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動化的控制系統(tǒng)能夠在短時間內(nèi)測量大量細(xì)胞粘附力，評估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測量因準(zhǔn)備時間過長而錯過最 佳測量時間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精 準(zhǔn)的結(jié)果。
121人看過
2023-06-09 11:41:52人人都是流式高手：Tumor-infiltrating lymphocytes(TILs) 分選秘籍
Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) 是指浸潤腫瘤組織的淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，負(fù)責(zé)識別和攻擊異常細(xì)胞，包括癌細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)對TILs的分選提供了一個重要的工具，用于表征、純化和研究浸潤腫瘤的免疫細(xì)胞群。它有助于研究人員了解TILs的組成、功能和潛在的治 療相關(guān)性，推動我們對腫瘤與免疫相互作用的理解。我們使用流式細(xì)胞術(shù)來分選TILs主要應(yīng)用場景如下：01、鑒定和表征：流式細(xì)胞術(shù)允許我們根據(jù)TILs表面標(biāo)記物的特征來鑒定和表征不同的亞群。通過使用針對CD3、CD4、CD8和其他免疫細(xì)胞標(biāo)記物的特異性抗體來標(biāo)記細(xì)胞，我們可以區(qū)分和定量TILs中的各種T細(xì)胞亞群。這有助于我們了解腫瘤微環(huán)境中TILs的組成和多樣性。02、特定TIL亞群的純化：流式細(xì)胞術(shù)分選使我們能夠分離和純化感興趣的特定TIL亞群。通過基于表面標(biāo)記物的表達(dá)，對細(xì)胞進(jìn)行分選和篩選，我們可以收集純凈的TIL亞群用于進(jìn)一步的下游應(yīng)用。這使研究人員能夠研究特定的TIL亞群，并研究其功能特性或基因表達(dá)譜。03、功能分析：分選后的TILs可用于功能性分析，以評估其免疫活性和功能。例如，可以測試分選后的TILs的增殖能力、細(xì)胞因子產(chǎn)生、對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性或其他功能性實驗。這些分析提供了有關(guān)TIL亞群功能能力和潛在抗腫瘤免疫反應(yīng)的見解。04、基因組學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)分析：流式細(xì)胞術(shù)分選可以獲得純凈的TIL細(xì)胞群，進(jìn)而進(jìn)行基因組學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)分析。通過分析分選TILs的基因表達(dá)或蛋白質(zhì)譜，研究人員可以更深入地了解與TILs在腫瘤免疫中相關(guān)的分子機(jī)制和信號通路。然而不同于外周血、脾 臟中的淋巴細(xì)胞，TILs的流式檢測存在更多的不確定性，需要有效優(yōu)化包括樣本處理、配色方案、上樣條件以及分析方法等實驗設(shè)計的各個方面，才能實現(xiàn)更為準(zhǔn)確、真實的多色復(fù)雜樣本流式檢測。圖1為外周血來源樣本淋巴細(xì)胞分型的流式檢測數(shù)據(jù)，由圖可見，淋巴細(xì)胞群體T、B細(xì)胞分群明顯，T細(xì)胞亞群也可清晰區(qū)分。另外，我們也可以看到，該數(shù)據(jù)以FSC通道設(shè)定閾值，其閾值設(shè)定值較低，導(dǎo)致碎片及噪音信號干擾明顯，不過由于血液樣本碎片較少，與細(xì)胞分群明顯，故而對最 終結(jié)果的影響并不大。圖1 血液樣本淋巴細(xì)胞免疫分型流式數(shù)據(jù)然而，當(dāng)我們使用同樣的模板檢測腫瘤組織樣本時，數(shù)據(jù)就出現(xiàn)了明顯問題。實體瘤組織細(xì)胞構(gòu)成復(fù)雜，并且在將組織樣本制備成單細(xì)胞樣本的過程中會產(chǎn)生大量的細(xì)胞碎片，這些雜質(zhì)細(xì)胞及碎片會對流式檢測造成顯著的干擾。如圖2所示，T細(xì)胞中出現(xiàn)了大量CD19和CD3雙陽性細(xì)胞，不符合已有文獻(xiàn)報道的結(jié)果。這些雙陽性細(xì)胞主要是由于雜質(zhì)細(xì)胞及碎片的非特異干擾導(dǎo)致的。這些干擾對于流式檢測及流式分選的準(zhǔn)確性有很大影響，甚至?xí)?dǎo)致得出錯誤的結(jié)論。圖2 浸潤腫瘤組織的淋巴細(xì)胞免疫分型流式數(shù)據(jù)那么，基于以上數(shù)據(jù)，我們應(yīng)該如何優(yōu)化實驗設(shè)計以提高浸潤腫瘤組織的淋巴細(xì)胞分選的準(zhǔn)確性呢？這里給大家以下幾點建議：01、增加Pan-Marker檢測：這里的Pan-Marker是指目標(biāo)細(xì)胞群均表達(dá)，但其他細(xì)胞群體及碎片不表達(dá)的表面標(biāo)記。CD45廣泛表達(dá)于免疫系統(tǒng)的各個細(xì)胞亞群上，但在非免疫細(xì)胞上沒有表達(dá)或表達(dá)很低。因此，在檢測淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞時，可通過檢測CD45是否表達(dá)來區(qū)分免疫細(xì)胞及非免疫細(xì)胞，以達(dá)到排除雜質(zhì)細(xì)胞干擾的目的。02、優(yōu)化樣本制備方案：對復(fù)雜樣本來講，樣本制備方案是否合適決定了流式實驗的成功率?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)報道并通過預(yù)實驗來選擇最 佳的消化酶配方和消化時間，在確保細(xì)胞得率的同時盡量減少雜質(zhì)干擾并最 大限度的保存細(xì)胞活性及功能。此外，選擇合適的細(xì)胞分離手段進(jìn)行目的細(xì)胞的富集。例如，若針對淋巴細(xì)胞檢測，利用Ficoll或Percoll密度梯度離心法富集單個核細(xì)胞，可有效去除脂肪、碎片及雜質(zhì)細(xì)胞的干擾。03、進(jìn)行Fc封閉：組織浸潤的多種細(xì)胞，特別是單核/巨噬細(xì)胞以及DC細(xì)胞高表達(dá)抗體Fc端的受體。這些細(xì)胞在進(jìn)行流式抗體標(biāo)記時，即使不表達(dá)相關(guān)抗原，也可通過Fc受體非特異性的結(jié)合流式抗體的Fc端，從而導(dǎo)致非特異信號。要解決這一問題，可購買商業(yè)化Fc封閉試劑，在標(biāo)記流式抗體前進(jìn)行Fc封閉即可。04、合理設(shè)定閾值：閾值的設(shè)定與實驗?zāi)康南⑾⑾嚓P(guān)。在流式分析實驗中，應(yīng)當(dāng)設(shè)定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號，僅保留少量碎片信號即可。在流式分選實驗中，若分選所得細(xì)胞用于培養(yǎng)，同樣應(yīng)當(dāng)設(shè)定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號，僅保留少量碎片信號，這樣做可以有效提高分選效率及回收率；但若分選所得細(xì)胞用于qPCR、測序，特別是單細(xì)胞測序等基因組學(xué)應(yīng)用，由于碎片中含有一定量的核酸片段乃至細(xì)胞核碎片，在分選過程中就需要將盡可能多的碎片與目的細(xì)胞區(qū)分，因此應(yīng)當(dāng)設(shè)定較低的閾值以暴露足量的碎片信號讓分選儀器檢測到，進(jìn)而有效確保分選所得目的細(xì)胞不摻雜核酸碎片，以免影響后續(xù)實驗準(zhǔn)確性。05、利用空白熒光通道排除非特異：什么是空白熒光通道呢?舉一個例子，我們設(shè)計一個3色實驗標(biāo)記FITC、PE、PE-Cy7三種染料，沒有標(biāo)記APC，在檢測時APC通道就是空白通道，是不應(yīng)該有陽性信號的。復(fù)雜樣本中的部分雜質(zhì)細(xì)胞有較強(qiáng)的非特異熒光信號，通常這些非特異的熒光信號在所有的流式熒光通道中均可檢測到?；谶@一原理，我們可在上樣時預(yù)留一到兩個空白熒光通道，樣本中的目的細(xì)胞沒有標(biāo)記這些空通道的熒光素，在這些通道里面是陰性的，而雜質(zhì)細(xì)胞的非特異信號在空白通道中通常也是陽性的，我們就可以通過設(shè)門選擇空白通道中的陰性細(xì)胞來達(dá)到去除非特異信號的目的。需要注意的是，利用這一方法時要充分考慮補(bǔ)償?shù)挠绊?，?好選擇與已用通道補(bǔ)償小或無補(bǔ)償?shù)耐ǖ雷鳛榭瞻淄ǖ馈?6、增加細(xì)胞死活染料：死細(xì)胞的非特異性地結(jié)合會增加假陽性。死細(xì)胞會產(chǎn)生自發(fā)熒光干擾特定信號的檢測。在TILs分選中去除死細(xì)胞?？梢栽黾訑?shù)據(jù)準(zhǔn)確性：死亡的細(xì)胞可能會釋放細(xì)胞碎片和細(xì)胞內(nèi)成分，這可能會干擾實驗結(jié)果，引入假陽性或假陰性結(jié)果。通過去除死細(xì)胞，可以提高分選結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。并且為分選后TILs細(xì)胞活力提供保證：分選到活細(xì)胞可以保證后續(xù)實驗的有效性和可靠性。死亡細(xì)胞不具備正常的生物活性和功能，因此分選到活細(xì)胞可以確保后續(xù)實驗?zāi)軌蚍从痴鎸嵉募?xì)胞生物學(xué)狀態(tài)。圖3 無死細(xì)胞排除處理的樣本分析比較圖4 有死細(xì)胞排除處理的樣本分析比較復(fù)蘇后的PBMC在免疫染色之前不添加（圖 3）或者添加ViaKrome 405可固定活性染料（55℃，10分鐘）（圖 4）。然后，使用Perfix-nc細(xì)胞染色試劑盒（型號 B10825）處理細(xì)胞，并用Granzyme B-FITC、CD19-PE、CD14-ECD、CD79a-PC5.5、CD3-PC7 和 CD45- Krome Orange 進(jìn)行染色。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計信息顯示：兩個不同條件下，門內(nèi)細(xì)胞在上一門級百分比也不一樣，充分展示了消除死細(xì)胞以后的數(shù)據(jù)效果。
189人看過
2023-07-03 11:42:58人人都是流式高手：GFP分選，這還有我不會的？
很常見的場景如下：細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，想用流式檢測表達(dá)GFP細(xì)胞的百分比并且分選，但是不同的設(shè)門方法讓GFP陽性細(xì)胞百分比看起來有差異，究竟下面哪種策略才適合呢？今天我們主要討論一下FSC和SSC上設(shè)門對GFP陽性細(xì)胞百分比的影響。讓我們一個一個設(shè)門，把每種情況具體看一下。保持FITC通道上的門不變，我們來看一下在前向和側(cè)向的散點圖上設(shè)門在不同的位置，代表你選擇了什么類型的細(xì)胞。只有P1賦予了藍(lán)色，其他門的顏色去掉，這樣，我們就可以很方便的看出來細(xì)胞群在不同的圖上所處的位置。第 一種設(shè)門，除了左下角靠近0的碎片不圈，其他基本都圈上，從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細(xì)胞也有粘連細(xì)胞，P2門下 GFP陽性細(xì)胞百分比為61.36%。第二種設(shè)門，只圈最密集的這一群，從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來，這部分的細(xì)胞基本都是單個的，P2門下 GFP陽性細(xì)胞百分比為65.39%，較第 一種高。第三種設(shè)門，密集細(xì)胞群左邊的和左下角靠近0的碎片不圈，只圈右邊的這兩群，從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細(xì)胞也有粘連細(xì)胞，P2門下 GFP陽性細(xì)胞百分比為65.70%，較第 一種高，和第二種差不多，但是稍微高一點。這樣分析下來，大家最 大的困惑是這三群細(xì)胞要不要圈，怎么圈才是最 好的？讓我們在第 一張F(tuán)SC和SSC的散點圖上根據(jù)細(xì)胞群設(shè)三個門。三個門分別為P1、P4和P5，顯示了三種不同的細(xì)胞群。P1顯示為單個細(xì)胞，F(xiàn)ITC通道上陽性細(xì)胞比例為65.54%。P4顯示大部分為粘連的細(xì)胞，因此在FITC通道上的陽性細(xì)胞比例為71.43%，較P1細(xì)胞群高，如果分析時加入這群細(xì)胞會增加GFP陽性細(xì)胞百分比。如果在單克隆分選中選擇這群，會導(dǎo)致雖然篩選到陽性細(xì)胞，但是單克隆源性降低。P5顯示為單個細(xì)胞，但是因為FSC較P1小，考慮是細(xì)胞狀態(tài)不好細(xì)胞呈現(xiàn)皺縮導(dǎo)致，所以其在FITC通道上的陽性細(xì)胞比例為20.15%，較P1細(xì)胞群低的多，如果分析時加入這群細(xì)胞則會降低GFP陽性細(xì)胞百分比。如果加入7AAD染料，這群會呈現(xiàn)出陽性，所以在分選中這群細(xì)胞不該圈選，或者在去除死細(xì)胞的門中去除。由此可見，如果只想要分析狀態(tài)好的單個細(xì)胞的GFP陽性百分比，那你可以選擇P1門的設(shè)門方式，當(dāng)然也可以把P1和P4都選上，再用SSC-A和SSC-H去掉粘連細(xì)胞對數(shù)據(jù)的干擾。練習(xí)題如果您在細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，流式檢測表達(dá)mCherry細(xì)胞的百分比時發(fā)現(xiàn)，mCherry通道細(xì)胞群并沒有呈現(xiàn)明顯分開的兩群（由于細(xì)胞在mCherry通道有較高的自發(fā)熒光），要怎么確定mCherry細(xì)胞百分比并且分選呢？
316人看過
2023-05-20 12:59:12測定單克隆細(xì)菌群體中單細(xì)胞對抗生素的敏感性
鑒于抗菌素耐藥性的出現(xiàn)，了解細(xì)胞群體對抗生素反應(yīng)的異質(zhì)性至關(guān)重要。因為藥物可以施加選擇壓力，導(dǎo)致抗性表型的出現(xiàn)。迄今為止，無論是整體方法還是單細(xì)胞方法都無法將單細(xì)胞易感性的異質(zhì)性與人群對抗生素的反應(yīng)聯(lián)系起來。在這里，我們提出了一個平臺，通過使用錨定微流體滴和圖像和數(shù)據(jù)分析管道，測量單個大腸桿菌細(xì)胞在不同環(huán)丙沙星濃度下形成小菌落的能力。微流控結(jié)果與抗生素敏感性的經(jīng)典微生物學(xué)測量結(jié)果進(jìn)行了基準(zhǔn)測試，顯示池微流控芯片與重復(fù)的批量測量結(jié)果之間的一致性。此外，單細(xì)胞形成菌落的實驗可能性用于提供概率抗生素敏感性曲線。除了概率觀點外，微流控格式還可以隨著時間的推移對大量單個細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行表征。該管道可用于比較不同菌株對具有不同作用機(jī)制的抗生素的反應(yīng)。
144人看過
高低溫交變試驗箱
單細(xì)胞分選
卡爾費休水分測定儀
離心機(jī)
氮吹儀
電子天平
電感耦合等離子體質(zhì)譜儀
多肽合成儀
直讀光譜儀
旋轉(zhuǎn)圓盤電極
基因擴(kuò)增儀
拉曼光譜儀
設(shè)備更新
溫度傳感器
飛行時間質(zhì)譜儀
差熱分析儀
流量計
高低溫交變試驗箱
單細(xì)胞分選
烘箱
多參數(shù)水質(zhì)檢測儀
卡爾費休水分測定儀
離心機(jī)
氮吹儀
煙氣分析儀
電子天平
多肽合成儀
剝離強(qiáng)度試驗機(jī)
旋轉(zhuǎn)圓盤電極
基因擴(kuò)增儀
拉曼光譜儀
風(fēng)速儀
設(shè)備更新
溫度傳感器
蛋白純化
飛行時間質(zhì)譜儀
數(shù)碼顯微鏡
塵埃粒子計數(shù)器
測溫儀
流量計
fbrm400
吹掃捕集儀
MFLI鎖相放大器
制備系統(tǒng)
水位、雨量、流速和流量監(jiān)測儀
高低溫交變試驗箱
形態(tài)分析儀
植物生長箱
數(shù)控超聲波清洗器
在線氨氮分析儀
近紅外面陣探測器
人工智能氣候箱
單細(xì)胞分選
烘箱
水質(zhì)采樣器
振動分析儀
多參數(shù)水質(zhì)檢測儀
手持式拉曼光譜儀
卡爾費休水分測定儀
多點磁力攪拌器
粗糙度測量儀
微生物快速檢測儀
數(shù)顯旋轉(zhuǎn)粘度計
離心機(jī)
靜電紡絲儀
FBRM
真空趕酸系統(tǒng)
氮吹儀
細(xì)胞片鉗
煙氣分析儀
醫(yī)院檢驗科設(shè)備
純水煙霧發(fā)生器
接觸角測定儀
real time PCR
電子天平
高錳酸鉀指數(shù)分析儀